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實(shí)驗(yàn)技術(shù)流程
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實(shí)驗(yàn)常見問題
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結(jié)果分析
在分析轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用位點(diǎn)時(shí)，一般先采取Luciferase片段缺失實(shí)驗(yàn)初步分析，確定目標(biāo)調(diào)控因子是否調(diào)控目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄及大概的作用區(qū)域。對(duì)縮小范圍的區(qū)域進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測可能位點(diǎn)后，采用Luciferase定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)確定真正的轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果及結(jié)論如下所示：
1 Luciferase片段缺失實(shí)驗(yàn)
經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)多次裁切對(duì)熒光素酶表達(dá)量產(chǎn)生的影響相同（即檢測組與空白組有明顯差異，但各裁切的檢測組間沒有明顯差異），故可推斷轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點(diǎn)應(yīng)位于-282~近啟動(dòng)子端區(qū)域。
2 Luciferase定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)
對(duì)不同位點(diǎn)（生物信息學(xué)預(yù)測）分別進(jìn)行點(diǎn)突變，LXRE2位點(diǎn)突變后的檢測組與野生型的檢測組間存在明顯差異，而LXRE1位點(diǎn)突變后的檢測組與野生型的檢測組間沒有明顯差異，故可推斷轉(zhuǎn)錄調(diào)控位點(diǎn)應(yīng)為LXRE2。