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實驗技術流程

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實驗常見問題

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結果分析

對于一幅RNA pull-down實驗結果Figure，應包含位點作用示意圖、WB或質譜結果數據分析圖，并應在Supplement中補充相關的驗證性實驗圖片，具體如下圖所示。

      RNA 序列： G表示空間構象的變化， AS表示互補鏈的的二級結構， S表示正義鏈的二級結構。

      Figure A：

      用不同的A、AS、G RNA序列去Pulling Down蛋白符合物，并用不同的KCL濃度梯度洗脫。蛋白抗體NCL hnRNP U hnRNP F RPL7 hnRNP K的單抗進行WB實驗。檢測A AS G特定區段的結合的蛋白復合物的組分。

      Figure B：

      RNA Pull down后的將蛋白復合物進行質譜實驗，發現結合蛋白NCL的肽段。不同RNA構象A、AS、G結合的肽段的不同。

      Figure C：

      通過重組NCL到GST上，通過GST Pull down 捕獲符合物，進行qRT-PCR檢測RNA片段AS、S、G和細胞組成型表達RNA（Unbound RNA GAPDH）。

      Figure D：

      RNA Pull down結果進行SDSPAGE電泳檢測。上面四泳道分別為不同的RNA捕獲方式，UTP生物素化，無生物素化等。

      Supplement：

      A RNA motif（結構域）注釋和motif生物素化結合鏈霉親和素。

      B 在不同的處理條件下（ATP depletion）下進行RNA pulling down后用 Cup和Smaug 蛋白單抗進行WB檢測。

      C RNA Pull down的RNA探針，在加上Cap帽子結構和不加帽子的情況下捕獲的蛋白用elF4G翻譯延伸因子 CuP蛋白進行WB。有帽子結構的才能有翻譯效應。

• 1 . 基因表達調控概述
  • 1.1. 轉錄調控與轉錄激活
  • 1.2. 轉錄后調控
  • 1.3. miRNA與lncRNA
• 2 . 基因表達調控研究進展
• 3 . 基因表達調控研究方法
• 4 . 基因表達調控主要實驗技術
  • 4.1. 染色質免疫沉淀技術 ChIP
  • 4.2. RNA結合蛋白免疫沉淀技術 RIP
  • 4.3. RNA pull-down
  • 4.4. DNA pull-down
  • 4.5. 熒光素酶檢測技術 Luciferase
  • 4.6. 凝膠遷移/電泳遷移率實驗 EMSA